Plásmido CRISPR de Activación (h) FHL-2: sc-402930-ACT

El gen humano **FHL2** codifica **FHL-2**, una proteína adaptadora que contiene dominios LIM y que actúa como **corregulador transcripcional** y **andamiaje**, conectando señales de transducción con programas de expresión génica. FHL-2 interactúa con vías que controlan la organización del citoesqueleto, la adhesión celular y la mecanotransducción, y puede modular de manera dependiente del contexto las salidas transcripcionales aguas abajo de la señalización **Wnt/β-catenina**, **TGF-β/SMAD** y **MAPK**. A través de interacciones con receptores nucleares y otros factores de transcripción, FHL-2 contribuye a la regulación de la proliferación, la diferenciación y la remodelación en respuesta al estrés. Se han descrito una expresión desregulada de FHL2 y un acoplamiento alterado de estas vías en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluyendo la biología tumoral, procesos relacionados con la fibrosis y la remodelación cardiovascular, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos.

FHL-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FHL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FHL-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FHL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FHL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FHL-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FHL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FHL-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FHL-2 en células tumorales con expresión de FHL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.