FGFR-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431146-ACT

O gene Fgfrl1 de camundongo codifica o FGFR-5, uma proteína atípica semelhante a receptor de fator de crescimento de fibroblastos, capaz de modular os resultados da sinalização de FGF ao influenciar a disponibilidade de ligantes e a dinâmica dos complexos receptores. O FGFR-5 está implicado na regulação de processos do desenvolvimento, incluindo organogênese, padronização tecidual e interações célula–célula, com efeitos a jusante em vias comumente associadas à biologia dos FGFR, como a sinalização MAPK/ERK e PI3K/AKT. Em sistemas de mamíferos, alterações na função de FGFRL1 têm sido associadas a defeitos de morfogênese e do desenvolvimento cardiopulmonar, sustentando sua relevância para mecanismos de doenças congênitas. Como membro não canônico da família de receptores, o FGFR-5 oferece um ponto de entrada útil para dissecar como o ajuste fino da via de FGF afeta a diferenciação e a homeostase tecidual.

FGFR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fgfrl1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGFR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fgfrl1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fgfrl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGFR-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fgfrl1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGFR-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGFR-5 em células tumorais com expressão de Fgfrl1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.