FGF-BP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404956-ACT

FGFBP1 codifica a proteína ligadora de fator de crescimento de fibroblastos 1 (FGF-BP), um transportador secretado que mobiliza FGFs ligados à heparina a partir da matriz extracelular e aumenta a biodisponibilidade da sinalização por FGF. Ao potencializar as interações ligante–receptor, a FGF-BP pode influenciar processos associados às vias MAPK/ERK e PI3K/AKT, incluindo proliferação celular, migração e remodelamento angiogênico em microambientes teciduais. Alterações na expressão de FGFBP1 foram relatadas em múltiplos contextos de doença e a proteína é frequentemente estudada como moduladora de fenótipos induzidos por fatores de crescimento, da dinâmica da matriz extracelular e da comunicação estroma–epitélio. Essas propriedades fazem de FGFBP1 um alvo útil para estudos mecanísticos da regulação da via de FGF e das contribuições do proteoma secretado para mudanças no estado celular.

FGF-BP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGFBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-BP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGFBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGFBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-BP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGFBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-BP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-BP em células tumorais com expressão de FGFBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.