FGF-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403118-ACT

FGF9 codifica o fator de crescimento de fibroblastos 9 (FGF-9), um mitógeno secretado que se liga à heparina e sinaliza principalmente por meio de receptores FGFR para regular a proliferação celular, a sobrevivência e a especificação de linhagens durante o desenvolvimento e a homeostase tecidual. A atividade do FGF-9 integra-se a cascatas de receptores tirosina-quinase, incluindo as vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ, influenciando interações epitélio–mesênquima, respostas angiogênicas e a remodelação da matriz extracelular. A expressão desregulada de FGF9 ou a sinalização aberrante da via FGFR tem sido associada a programas de desenvolvimento alterados e a fenótipos oncogênicos em múltiplos contextos teciduais, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de redes de fatores de crescimento. Como ligante endógeno dentro do eixo mais amplo FGF–FGFR, o FGF-9 é frequentemente investigado por seus efeitos sobre programas transcricionais que governam diferenciação, migração e proliferação.

FGF-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-9 em células tumorais com expressão de FGF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.