FGF-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401243-ACT

FGF7 codifica o fator de crescimento de fibroblastos 7 (FGF-7), um ligante parácrino produzido predominantemente por células mesenquimais que sinaliza para alvos epiteliais por meio do FGFR2b, promovendo proliferação, sobrevivência, migração e reparo tecidual. A atividade do FGF-7 influencia o crosstalk epitélio–estroma e sustenta programas morfogenéticos e de cicatrização, com ativação a jusante de MAPK/ERK, PI3K–AKT e redes transcricionais relacionadas. A desregulação da sinalização FGF7/FGFR2b tem sido associada à alteração da integridade da barreira e à expansão epitelial aberrante, tornando-a relevante para estudos de inflamação, fibrose e remodelamento de vias oncogênicas. Como fator de crescimento dependente do contexto, o FGF-7 é frequentemente investigado por seu papel na modulação de estados de diferenciação epitelial e de fenótipos dirigidos pelo microambiente.

FGF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-7 em células tumorais com expressão de FGF7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.