FGF-23 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425719

Panoramica

Il fattore di crescita dei fibroblasti 23 (FGF-23), codificato dal gene murino *Fgf23*, è un FGF endocrino prodotto prevalentemente da osteociti e osteoblasti che mantiene l’equilibrio sistemico di fosfato e vitamina D. Agendo attraverso i recettori FGFR in modo dipendente da Klotho, FGF-23 sopprime il riassorbimento renale del fosfato e modula il metabolismo della vitamina D, coordinando così l’omeostasi degli ioni minerali con il rimodellamento osseo. Una segnalazione di FGF-23 disregolata è associata ad alterazioni nella gestione del fosfato, difetti di mineralizzazione scheletrica e cambiamenti secondari nelle vie dell’ormone paratiroideo e della vitamina D, rendendolo un nodo chiave nel crosstalk endocrino osso–rene. In quanto regolatore del metabolismo minerale associato a biomarcatori, *Fgf23* è ampiamente studiato in modelli di omeostasi del fosfato alterata e nella fisiologia ossea e renale correlata.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-23 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fgf23 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fgf23 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fgf23 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FGF-23.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fgf23 per lo studio della segnalazione di FGF-23, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fgf23 critici per la funzione di FGF-23
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fgf23 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FGF-23 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FGF-23 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fgf23. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FGF-23 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FGF-23 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fgf23 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fgf23 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.