FGF-23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401831-ACT

O fator de crescimento de fibroblastos 23 (FGF23) codifica a proteína endócrina FGF-23, um regulador-chave da homeostase sistêmica do fosfato e da vitamina D. Secretado principalmente por osteócitos e osteoblastos, o FGF-23 sinaliza por meio de FGFRs de modo dependente de Klotho para suprimir a reabsorção renal de fosfato e reduzir a síntese de 1,25-di-hidroxivitamina D, integrando a comunicação endócrina entre osso e rim. A expressão desregulada de FGF-23 está associada a distúrbios hereditários e adquiridos do metabolismo mineral, incluindo raquitismo/osteomalácia hipofosfatêmica, osteomalácia induzida por tumor e distúrbio mineral e ósseo relacionado à doença renal crônica. Como um nó de via que conecta o transporte de fosfato, o metabolismo da vitamina D e a sinalização FGF/FGFR, o FGF-23 é amplamente estudado em fisiologia renal, biologia esquelética e respostas ao estresse cardiometabólico.

FGF-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF23 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF23 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF23, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF23 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-23 em células tumorais com expressão de FGF23 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.