fetuin-A Plasmide Double Nickase (h): sc-401125-NIC

AHSG codifica la glicoproteina plasmatica umana fetuina-A, un fattore secretorio di origine epatocitaria che circola in elevata abbondanza e si lega a complessi di calcio e fosfato per modulare l’omeostasi minerale extracellulare. La fetuina-A partecipa alla regolazione della calcificazione formando particelle calciproteiche e influenzando la segnalazione osteogenica, e può interagire con molteplici ligandi incidendo su vie infiammatorie e metaboliche. Nei sistemi cellulari, alterazioni dell’espressione di AHSG o della disponibilità di fetuina-A sono state associate a cambiamenti nella segnalazione dell’insulina, nella funzione degli adipociti e negli stati di attivazione dei macrofagi. La disregolazione della fetuina-A è stata studiata in contesti quali la calcificazione ectopica, fenotipi associati alla sindrome metabolica, infiammazione cronica e patobiologia renale e vascolare, a supporto del suo impiego come marcatore meccanicistico in modelli di ricerca traslazionale.

fetuin-A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AHSG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AHSG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AHSG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AHSG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.