fetuin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401125

Visão geral

AHSG codifica a fetuína-A, uma glicoproteína secretada produzida predominantemente por hepatócitos, que circula no plasma e se associa a complexos minerais e de lipoproteínas. A fetuína-A modula a homeostase mineral extracelular ao se ligar ao cálcio e ao fosfato, influenciando a formação de partículas calciproteicas e controlando a calcificação ectópica; além disso, interage com a sinalização de TGF-β/BMP (proteínas morfogenéticas ósseas) para moldar programas de diferenciação osteogênica. Como proteína sérica multifuncional, a fetuína-A é frequentemente estudada no contexto de inflamação metabólica, regulação da sinalização da insulina e respostas de macrófagos, conectando a biologia de AHSG a fenótipos cardiometabólicos e relacionados à calcificação. Alterações na expressão de AHSG ou nos níveis de fetuína-A têm sido associadas a mudanças na função hepática e a processos sistêmicos relevantes para a calcificação aterosclerótica, o desequilíbrio mineral na doença renal crônica e modelos de síndrome metabólica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO fetuin-A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AHSG em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AHSG, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AHSG na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína fetuin-A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AHSG para a investigação da sinalização de fetuin-A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AHSG críticos para a função fetuin-A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AHSG para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo fetuin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo fetuin-A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AHSG. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo fetuin-A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR fetuin-A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AHSG para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AHSG definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.