fetuin-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419056-ACT

O gene Ahsg de camundongo codifica a fetuína‑A, uma glicoproteína secretada de origem hepática que circula como um regulador multifuncional do metabolismo mineral e da sinalização inflamatória. A fetuína‑A liga-se ao cálcio e ao fosfato para formar partículas calciproteicas solúveis, limitando a deposição mineral ectópica e influenciando processos de mineralização da matriz extracelular. Ela também modula a sinalização do receptor de insulina e as respostas imunes inatas, conectando programas secretórios hepáticos à homeostase metabólica sistêmica. Alterações na abundância de fetuína‑A têm sido associadas a disfunção metabólica, fenótipos de fígado gorduroso e patologia anormal relacionada à calcificação em modelos pré-clínicos, apoiando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas cardiometabólicas e de mineralização.

fetuin-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ahsg sem alterar a sequência de ADN subjacente.

fetuin-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ahsg em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ahsg, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de fetuin-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ahsg nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de fetuin-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via fetuin-A em células tumorais com expressão de Ahsg silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.