Ferrochelatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402043

Visão geral

FECH codifica a ferroquelatase humana, uma enzima da membrana interna mitocondrial que catalisa a inserção de ferro ferroso na protoporfirina IX para produzir heme, a etapa terminal da via de biossíntese de porfirinas/heme. Ao controlar a disponibilidade de heme, a ferroquelatase influencia a maturação eritroide, a respiração mitocondrial, o equilíbrio redox e a montagem de hemoproteínas. A disfunção da atividade de FECH está associada ao acúmulo de porfirinas e à alteração da homeostase do heme, com relevância para a protoporfiria eritropoiética e para fenótipos mais amplos de estresse metabólico em células com alta demanda de heme. Assim, FECH é amplamente estudado em biologia mitocondrial, manejo do ferro e metabolismo de porfirinas, incluindo respostas da via a perturbações oxidativas e metabólicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ferrochelatase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FECH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FECH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FECH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ferrochelatase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FECH para a investigação da sinalização de Ferrochelatase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FECH críticos para a função Ferrochelatase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FECH para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ferrochelatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Ferrochelatase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FECH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ferrochelatase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Ferrochelatase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FECH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FECH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.