ferritin light chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400924

Visão geral

FTL codifica a cadeia leve da ferritina, um componente central do heteropolímero de ferritina que sequestra e mineraliza o ferro para manter a homeostase celular do ferro e limitar o estresse oxidativo impulsionado pelo ferro. Ao amortecer os pools de ferro lábil, a FTL influencia o equilíbrio redox, a função mitocondrial e a sinalização responsiva ao ferro por meio da rede regulatória IRP/IRE, coordenando o armazenamento de ferro com a captação e a utilização de ferro. Alterações na composição ou na expressão da ferritina podem perturbar a sensibilidade à ferroptose e as respostas ao estresse inflamatório ao modificar a disponibilidade de ferro e a propensão à peroxidação lipídica. A desregulação da FTL e da biologia da ferritina tem sido associada à neurodegeneração, ao manejo inadequado do ferro relacionado à anemia e à remodelação metabólica associada ao câncer, tornando a FTL um ponto útil para estudar fenótipos celulares dependentes de ferro.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ferritin light chain (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FTL em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FTL, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FTL na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ferritin light chain.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FTL para a investigação da sinalização de ferritin light chain, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FTL críticos para a função ferritin light chain
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FTL para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ferritin light chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ferritin light chain Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FTL. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ferritin light chain Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ferritin light chain (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FTL para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FTL definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.