FER1L6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405070-ACT

FER1L6は、Ca2+依存的な膜動態やリン脂質依存的なタンパク質相互作用に関与するとされる、複数のC2ドメインをもつ大型タンパク質「フェルリン（ferlin）ファミリー」の一員をコードします。FER1L6は他のフェルリンに比べて解析が進んでいないものの、このタンパク質群は一般に、小胞輸送、膜修復、エンドサイトーシス、ならびに細胞シグナル伝達や細胞骨格リモデリングに影響する膜融合イベントの調節と広く関連づけられています。FER1L6の発現やゲノム異常は複数のトランスクリプトームおよびがんゲノミクスのデータセットで報告されており、特定の細胞状況において増殖、遊走、ストレス適応などの過程に関与する可能性が示唆されます。これらの特性により、FER1L6はヒト細胞モデルにおける膜関連経路の機構解析や表現型変調の研究に有用な標的となります。

FER1L6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FER1L6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FER1L6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FER1L6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFER1L6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FER1L6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFER1L6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFER1L6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFER1L6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFER1L6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。