FEN-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403168

概要

FEN1はフラップエンドヌクレアーゼ1（FEN-1）をコードしており、岡崎フラグメント成熟およびロングパッチ型塩基除去修復において生じる5′フラップ中間体を切断する、構造特異的ヌクレアーゼです。FEN-1はPCNAやDNAポリメラーゼと協調して、DNA複製の忠実性の維持、停止した複製フォークの処理、ならびにゲノム不安定性を引き起こし得るDNA二次構造の解消を支えます。複製ストレス応答、修復経路の選択、染色体完全性の維持における役割を通じて、FEN1機能の変化は変異の蓄積や、がん生物学およびDNA損傷感受性に関連する変異シグネチャーと結び付けられています。そのためFEN-1は、DNA修復ネットワーク、複製に共役したプロセシング、チェックポイントシグナル伝達を研究するための機構解明の足がかりとして広く用いられています。

FEN-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFEN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FEN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FEN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FEN-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FEN-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FEN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FEN-1の機能に不可欠なFEN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FEN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FEN-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFEN-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FEN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FEN-1 HDRプラスミド（h）および FEN-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFEN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFEN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。