Fe65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403226

概要

APBB1は、アミロイド前駆体タンパク質（APP）と相互作用する神経系に豊富なアダプタータンパク質Fe65をコードしており、膜輸送と核内シグナル伝達を結び付けます。Fe65は、PTBドメインを介してAPPおよび関連受容体に結合することで、APPのプロセシングやエンドサイトーシス経路に関与し、AICDや転写調節因子などと多タンパク質複合体を形成して遺伝子発現に影響を与えます。これらの相互作用を通じてFe65は、シナプス機能、細胞骨格動態、調節性プロテオリシスを連結しており、これらはいずれも神経変性研究で頻繁に検討される過程です。APP–Fe65シグナル伝達の変化と、それに続く転写プログラムは、アルツハイマー病関連機序や、より広範な神経細胞ストレス応答の文脈で研究されています。

Fe65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAPBB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、APBB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、APBB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Fe65タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Fe65シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、APBB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Fe65の機能に不可欠なAPBB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、APBB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Fe65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFe65 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、APBB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Fe65 HDRプラスミド（h）および Fe65 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAPBB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAPBB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。