FcRH5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413461-ACT

FCRL5 (FcRH5) é um receptor imunorregulador restrito a células B, pertencente à família de receptores do tipo Fc, que modula os limiares de sinalização durante a ativação e a diferenciação das células B. Por meio de motivos citoplasmáticos baseados em tirosina de receptores imunes, o FcRH5 influencia vias dependentes de fosforilação associadas à sinalização do receptor de células B, à responsividade a citocinas e à homeostase imune. Sua expressão é enriquecida em diferentes subpopulações de células B maduras e é comumente avaliada como um marcador de transições de estado das células B em tecidos linfoides secundários. A expressão desregulada de FCRL5 tem sido associada a alterações na função das células B em contextos de estimulação imune crônica e em neoplasias derivadas de células B, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de biologia de células B e imunologia tumoral.

FcRH5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FCRL5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FcRH5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FCRL5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FCRL5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FcRH5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FCRL5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FcRH5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FcRH5 em células tumorais com expressão de FCRL5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.