Fc ε RIγ Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-417621-NIC

FCER1G codifica a subunidade de sinalização FcεRIγ, um adaptador contendo ITAM que se associa a múltiplos recetores imunitários para ligar o reconhecimento do ligando a cascatas de ativação intracelular. Em contextos de células mieloides e mastócitos, a FcεRIγ participa na sinalização de recetores Fc e de recetores de lectina do tipo C, promovendo a ativação de cinases Src/Syk, o fluxo de cálcio a jusante, a sinalização por MAPK e programas de transcrição que regulam a desgranulação, a produção de citocinas e respostas fagocíticas. Por estas vias, a FcεRIγ ajuda a moldar funções efetoras inatas e dependentes de anticorpos e é frequentemente estudada na inflamação alérgica, na biologia das infeções e na desregulação imunitária. Alterações na expressão ou na sinalização através de complexos de recetores associados à FcεRIγ têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e fornecem um ponto de entrada mecanístico para dissecar estados de ativação de células imunitárias.

Fc ε RIγ O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FCER1G em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FCER1G. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FCER1G. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FCER1G interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.