FBXO30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402735-ACT

FBXO30 codifica uma proteína do tipo F-box que atua como componente de reconhecimento de substratos dos complexos ligase E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ligando proteínas-alvo à degradação proteassomal dependente de ubiquitina. Por meio desse papel, o FBXO30 contribui para a regulação da homeostase proteica, da progressão do ciclo celular e da sinalização responsiva ao estresse, ao modular a estabilidade de efetores-chave de vias de sinalização. Alterações na atividade do sistema ubiquitina–proteassoma estão amplamente associadas à sinalização oncogênica, a estados inflamatórios e a fenótipos degenerativos, tornando a expressão e a função de FBXO30 relevantes para estudos mecanísticos nesses contextos. Em modelos celulares humanos, a modulação de FBXO30 oferece uma ferramenta para investigar redes de proteostase e os desfechos transcricionais e fenotípicos a jusante.

FBXO30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBXO30 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBXO30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBXO30 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBXO30, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBXO30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBXO30 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBXO30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBXO30 em células tumorais com expressão de FBXO30 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.