FBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424568-ACT

O gene Fubp1 de camundongo codifica a proteína 1 de ligação ao elemento far upstream (FBP1), um regulador que se liga a ácidos nucleicos de fita simples e modula a transcrição e o metabolismo de mRNA ao interagir com elementos regulatórios distais a montante e ao coordenar a dinâmica transcricional. A FBP1 influencia a progressão do ciclo celular, programas gênicos responsivos ao estresse e o controle pós-transcricional por meio de interações com complexos associados a promotores e com a maquinaria de processamento de RNA. A atividade desregulada de FUBP1/FBP1 tem sido associada a alterações na proliferação e no controle do estado de linhagem, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de regulação transcricional oncogênica e estabilidade do genoma. Em sistemas de modelos murinos, a perturbação da expressão de Fubp1 é relevante para dissecar o recrutamento de fatores de transcrição, a regulação associada à cromatina e vias que acoplam sinais de crescimento ao resultado da expressão gênica.

FBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fubp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fubp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fubp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fubp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBP1 em células tumorais com expressão de Fubp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.