FBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401293-ACT

O FUBP1 humano codifica a proteína de ligação ao elemento far upstream 1 (FBP1), um regulador que se liga a ácidos nucleicos de cadeia simples e modula programas transcricionais e pós-transcricionais por meio da interação com elementos associados a promotores e alvos de RNA. A FBP1 é mais conhecida por influenciar a expressão de MYC e redes gênicas mais amplas que governam a progressão do ciclo celular, a proliferação e respostas adaptativas ao estresse. Por meio dessas atividades, o FUBP1 se conecta a vias que controlam a regulação transcricional associada à cromatina e o metabolismo de RNA, tornando-se um nó-chave para o estudo da expressão gênica dependente de contexto. Alterações na atividade ou na dosagem de FUBP1 têm sido relatadas em múltiplos cenários relevantes para câncer e neurodesenvolvimento, sustentando seu uso em modelos mecanísticos de sinalização oncogênica, diferenciação e estabilidade do genoma.

FBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FUBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FUBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FUBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FUBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBP1 em células tumorais com expressão de FUBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.