FBL4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435345
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- FBL4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico FBL4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:FBL4 Anticorpo (A-7): sc-376102
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
FBL4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-435345 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Fbxl4 codifica uma proteína com domínio F-box e repetições ricas em leucina que atua como componente de reconhecimento de substratos dos complexos de ligase E3 de ubiquitina do tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), ajudando a direcionar proteínas específicas para degradação dependente de ubiquitina. Por meio da proteostase regulada, a FBXL4 pode influenciar a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e a dinâmica mais ampla do sistema ubiquitina–proteassoma. Em camundongos, alterações na atividade de FBXL4 têm sido associadas à homeostase mitocondrial e ao metabolismo energético celular, reforçando sua relevância para estudos de disfunção mitocondrial e fenótipos de doenças multissistêmicas associadas. Assim, Fbxl4 é um alvo útil para investigar como o controle de qualidade mediado por ubiquitina se integra a vias metabólicas e à manutenção de organelas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FBL4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Fbxl4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Fbxl4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Fbxl4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FBL4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Fbxl4 para a investigação da sinalização de FBL4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Fbxl4 críticos para a função FBL4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Fbxl4 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo FBL4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FBL4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Fbxl4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo FBL4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FBL4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Fbxl4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Fbxl4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.