FBL3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405317-ACT

FBXL21 codifica uma proteína com domínio F-box e repetições ricas em leucina que atua como o componente de reconhecimento de substrato de um complexo ligase E3 de ubiquitina do tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), direcionando alvos específicos para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma. Por meio da degradação proteica regulada, a FBXL21 contribui para o controle do tempo celular, das respostas ao estresse e da proteostase, com relevância particular para redes regulatórias circadianas e transcricionais. Ao modular a estabilidade de efetores de vias, a FBXL21 pode influenciar a dinâmica de sinalização, a coordenação do ciclo celular e a adaptação a estímulos ambientais. A desregulação de componentes do sistema ubiquitina–proteassoma, incluindo proteínas F-box, está amplamente associada à sinalização oncogênica, à neurobiologia e a fenótipos inflamatórios, tornando a FBXL21/FBL3B um nó útil para investigações mecanísticas.

FBL3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FBXL21 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FBL3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FBXL21 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FBXL21, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FBL3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FBXL21 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FBL3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FBL3B em células tumorais com expressão de FBXL21 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.