FAT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410778-ACT

FAT1は、組織形成（形態形成）の過程で細胞間接着、上皮の極性、ならびに細胞骨格の組織化の制御に寄与する非典型的カドヘリンをコードします。Hippo経路シグナル伝達や平面内細胞極性（PCP）プログラムに影響する相互作用を介して、FAT1は接触依存的な増殖制御、細胞移動、および細胞の方向性のある配置の協調に関与します。FAT1の発現異常や変異は、接着ダイナミクスの変化や異常なシグナル状態と関連し、がん生物学や発生異常に関与することが示唆されています。ヒト細胞モデルでは、FAT1は浸潤関連表現型、メカノトランスダクション、ならびに接着結合由来のシグナルに下流で起こる転写制御における役割が、しばしば研究されています。

FAT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。