FAST-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406686

Panoramica

FOXH1 codifica il fattore di trascrizione della famiglia forkhead FAST-1, un mediatore nucleare della segnalazione della superfamiglia TGF-β che coopera con i complessi SMAD2/3-SMAD4 per regolare la trascrizione responsiva a NODAL/Activina. FAST-1 si lega ai motivi forkhead nei promotori bersaglio e integra segnali di sviluppo che controllano la specificazione del mesendoderma, il patterning sinistra–destra e le transizioni epitelio–mesenchimali attraverso programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. Un’attività di FOXH1 deregolata è stata collegata a difetti congeniti della lateralità e ad alterazioni dello sviluppo embrionale precoce, e un output trascrizionale TGF-β/SMAD modificato è frequentemente associato a processi oncogeni quali invasione e metastasi. Nei modelli cellulari, FOXH1 rappresenta un nodo maneggevole per analizzare l’uso dei cofattori di SMAD, il reclutamento alla cromatina e il cross-talk tra vie di segnalazione che influenzano la differenziazione e la plasticità delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAST-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FOXH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FOXH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FOXH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAST-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FOXH1 per lo studio della segnalazione di FAST-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FOXH1 critici per la funzione di FAST-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FOXH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAST-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FAST-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FOXH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAST-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FAST-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FOXH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FOXH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.