FAST-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406686

Visão geral

FOXH1 codifica o fator de transcrição forkhead box FAST-1, um mediador nuclear da sinalização da superfamília TGF-β que coopera com complexos SMAD2/3–SMAD4 para regular a transcrição responsiva a NODAL/Activina. O FAST-1 liga-se a motivos forkhead em promotores-alvo e integra sinais do desenvolvimento que controlam a especificação do mesendoderma, o padrão esquerda–direita e as transições epitélio–mesênquima por meio de programas transcricionais dependentes do contexto. A atividade desregulada de FOXH1 tem sido associada a defeitos congênitos de lateralidade e a alterações no desenvolvimento embrionário inicial, e a alteração da saída transcricional de TGF-β/SMAD é frequentemente associada a processos oncogênicos como invasão e metástase. Em modelos celulares, FOXH1 constitui um ponto acessível para dissecar o uso de cofatores de SMAD, o recrutamento de cromatina e o crosstalk entre vias que afeta a diferenciação e a plasticidade de células tumorais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FAST-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FOXH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FOXH1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FOXH1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FAST-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FOXH1 para a investigação da sinalização de FAST-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FOXH1 críticos para a função FAST-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FOXH1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FAST-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FAST-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FOXH1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FAST-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FAST-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FOXH1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FOXH1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.