FAST-1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420290

Visão geral

Foxh1 (FAST-1/2) é um fator de transcrição da família forkhead box que atua como um efetor nuclear-chave da sinalização Activina/Nodal–TGF-β no desenvolvimento de camundongos. Ao se associar a complexos SMAD2/3–SMAD4, ele regula programas transcricionais que controlam a indução do mesendoderma, a especificação do eixo esquerda–direita e decisões iniciais de padronização. Redes gênicas dependentes de Foxh1 intersectam-se com vias que governam transições epitélio–mesênquima e o comprometimento de linhagem, tornando-o um nó amplamente utilizado para dissecar o controle transcricional dependente de sinalização. A perturbação desse eixo é relevante para malformações do desenvolvimento e para estudos mecanísticos da reprogramação transcricional induzida por TGF-β em contextos associados a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FAST-1/2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Foxh1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Foxh1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Foxh1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FAST-1/2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Foxh1 para a investigação da sinalização de FAST-1/2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Foxh1 críticos para a função FAST-1/2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Foxh1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FAST-1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo FAST-1/2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Foxh1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FAST-1/2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR FAST-1/2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Foxh1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Foxh1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.