FAPα Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420286-ACT

O Fap de camundongo codifica a proteína alfa de ativação de fibroblastos (FAPα), uma protease de serina de superfície celular enriquecida em fibroblastos ativados e em populações de células estromais que remodelam a matriz extracelular. A FAPα participa da proteólise pericelular e da renovação da matriz, moldando o reparo tecidual, o remodelamento associado à fibrose e as interações entre estroma e sistema imune em microambientes inflamatórios. A expressão desregulada de Fap é frequentemente usada como marcador de estados de fibroblastos ativados e tem sido associada a alterações promovidas por fibroblastos que influenciam o estroma associado a tumores, a dinâmica de cicatrização de feridas e a patologia inflamatória crônica.

FAPα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fap sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAPα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fap em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fap, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAPα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fap nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAPα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAPα em células tumorais com expressão de Fap silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.