FAPα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401511-ACT

A proteína alfa de ativação de fibroblastos (FAPα) é uma serina protease ancorada à membrana, da família das dipeptidil peptidases, que apresenta tanto atividade de dipeptidil peptidase quanto de endopeptidase, contribuindo para a remodelação da matriz extracelular. A FAP é tipicamente enriquecida em fibroblastos ativados e em compartimentos estromais, onde pode influenciar as interações célula–matriz, programas de remodelação tecidual e a sinalização parácrina no microambiente. Sua atividade tem sido associada a estados de ativação de fibroblastos, ao turnover do colágeno e à regulação de redes proteolíticas que se cruzam com processos de cicatrização e fibrose. A expressão desregulada de FAP é frequentemente estudada em contextos que envolvem remodelação estromal e alterações do microambiente associadas à inflamação, sustentando pesquisas sobre biologia da fibrose e estroma associado a tumores.

FAPα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAPα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAPα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAPα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAPα em células tumorais com expressão de FAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.