FAM98A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411841-ACT

FAM98A は、主に細胞質に局在し、転写後の遺伝子制御に関与する保存性の高い RNA 結合タンパク質をコードします。RNA プロセシングや翻訳関連のタンパク質複合体との関連が示されており、細胞のプロテオスタシスや増殖に結び付いたプログラムを支えると考えられています。FAM98A の発現変動は複数の腫瘍タイプで報告されており、増殖、ストレス適応、転移関連表現型といった文脈で検討されることが多い分子です。これらの特性から、FAM98A は RNA 代謝が腫瘍化シグナル伝達および細胞恒常性とどのように接続しているかを、ヒトのモデルシステムで解析するうえで有用な標的となります。

FAM98A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM98Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM98A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM98A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM98A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM98Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM98A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM98A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM98A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM98A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。