FAM26F CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405728-ACT

FAM26Fは、免疫細胞の生物学およびインターフェロン関連応答に関与するとされる小型の膜貫通タンパク質をコードしており、造血系細胞系列で発現が高く、炎症性刺激によって誘導されます。これまでに報告された機能的関連から、FAM26Fは白血球の活性化、細胞間コミュニケーション、ならびにサイトカイン駆動性経路と交差する免疫シグナル出力を形作る過程に関与することが示唆されています。免疫関連疾患の文脈や腫瘍免疫微小環境においてFAM26F発現の変化が観察されており、免疫調節の研究におけるマーカーおよび機序解明上の結節点としての有用性が支持されています。その結果、FAM26Fは、インターフェロン刺激プログラムや膜関連シグナルが免疫表現型および疾患関連の転写状態にどのように寄与するかを解明するうえで注目されています。

FAM26F CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM26Fの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM26F CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM26F 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM26F転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM26Fの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM26F遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM26F依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM26F発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM26F経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。