FAM150B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409087-ACT

FAM150B (também conhecido como ALKAL2) codifica um ligante secretado implicado na ativação da família ALK de receptores tirosina-quinase, apoiando a comunicação célula–célula e a regulação, dependente do contexto, de programas de crescimento e diferenciação. Por meio da sinalização de ALK, FAM150B pode interagir com cascatas downstream canônicas, como MAPK/ERK e PI3K/AKT, que influenciam proliferação, sobrevivência e padronização do desenvolvimento. A expressão de FAM150B é observada em tecidos neurais e outros, e a desregulação da sinalização no eixo ALK é relevante em contextos de pesquisa oncológica e do neurodesenvolvimento. Como modulador da atividade de receptores tirosina-quinase, FAM150B constitui um ponto útil para estudar o controle extracelular dos limiares de sinalização, a dinâmica de ativação do receptor e as respostas transcricionais.

FAM150B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM150B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM150B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM150B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM150B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM150B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM150B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM150B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM150B em células tumorais com expressão de FAM150B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.