FAM13A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405714-ACT

FAM13A (família com similaridade de sequência 13, membro A) codifica uma proteína citoplasmática implicada na regulação da sinalização de GTPases da família Rho e da dinâmica do citoesqueleto, com funções descritas na polaridade, migração e diferenciação de células epiteliais. Estudos genéticos e funcionais relacionam a FAM13A a vias que moldam a homeostase das vias aéreas e dos alvéolos, incluindo processos de adesão e remodelação celular que influenciam a função de barreira. Variações em FAM13A têm sido associadas a características de função pulmonar e à suscetibilidade a doenças respiratórias crônicas, sustentando seu uso como um ponto de entrada molecular para o estudo da biologia das vias aéreas. Em contextos relacionados a câncer e fibrose, alterações na expressão de FAM13A têm sido investigadas quanto aos efeitos sobre programas de proliferação e motilidade, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de remodelação tecidual.

FAM13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAM13A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAM13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAM13A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAM13A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAM13A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAM13A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAM13A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAM13A em células tumorais com expressão de FAM13A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.