FAK Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400089-LAC

PTK2 codifica a quinase de adesão focal (FAK), uma tirosina-quinase não receptora que integra sinais de integrinas e de receptores de fatores de crescimento para regular a dinâmica das adesões focais, a remodelação do citoesqueleto de actina e a mecanotransdução. A FAK coordena vias a jusante, incluindo PI3K–AKT, MAPK/ERK e a sinalização de GTPases da família Rho, para controlar a migração, a sobrevivência e a proliferação celulares. A atividade desregulada de FAK e a sinalização alterada de adesões focais estão frequentemente associadas a fenótipos invasivos, remodelação da matriz extracelular e programas transcricionais relacionados à metástase em múltiplos tipos de câncer. Além disso, a sinalização PTK2/FAK contribui para a angiogênese, para a percepção da matriz associada à fibrose e para o tráfego de células inflamatórias, tornando-a um nó-chave para o estudo de redes de sinalização dependentes de adesão.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAK (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PTK2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAK (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PTK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FAK. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PTK2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.