Plasmide Double Nickase (h) Factor VII: sc-402582-NIC

Le gène humain **F7** code le facteur de coagulation VII, un zymogène de sérine protéase dépendant de la vitamine K, produit principalement par les hépatocytes et sécrété dans le plasma. Lors d’une lésion vasculaire, le facteur VII se lie au facteur tissulaire (F3) et est converti en facteur VIIa, formant le complexe ténase extrinsèque qui initie la cascade de coagulation via l’activation des facteurs X et IX, entraînant en aval la génération de thrombine et la formation de fibrine. Cet axe facteur tissulaire–facteur VIIa interagit aussi avec la signalisation cellulaire via les récepteurs activés par des protéases (PAR), reliant la protéolyse hémostatique aux voies de la biologie inflammatoire et vasculaire. Des modifications de l’expression ou de l’activité de F7 sont associées à des diathèses hémorragiques et sont également étudiées dans le contexte du risque de thrombose et du dialogue coagulation–inflammation.

Factor VII Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus F7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de F7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de F7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de F7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.