Factor H Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401099-ACT

O fator complementar H (CFH) codifica o fator H, um regulador solúvel da via alternativa do complemento que protege as superfícies do hospedeiro ao acelerar a dissociação da C3 convertase e atuar como cofator para a inativação de C3b mediada pelo fator I. Ao discriminar o próprio do não próprio por meio de interações com glicosaminoglicanos e ácidos siálicos, o fator H ajuda a conter a amplificação do complemento, a opsonização e a sinalização inflamatória subsequente. Alterações na expressão ou na função de CFH estão associadas a atividade do complemento desregulada, implicada na degeneração macular relacionada à idade, na síndrome hemolítico-urêmica atípica e em fenótipos inflamatórios glomerulares. Assim, CFH é amplamente estudado na imunidade inata, na biologia vascular e renal e em modelos de lesão tecidual impulsionada pelo complemento.

Factor H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CFH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Factor H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CFH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CFH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Factor H. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CFH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Factor H no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Factor H em células tumorais com expressão de CFH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.