Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Factor B Double Nickaseプラスミド (h): sc-402091-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Factor B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Factor Bダブルニカースプラスミド（h）およびFactor Bダブルニカースプラスミド（h2）は、CFBを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Factor B 抗体 (D22/3): sc-47681
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Factor B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402091-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Factor B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402091-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
補体因子B（CFB）遺伝子は、第2経路（オルタナティブ経路）において中心的に働くセリンプロテアーゼ前駆体である因子Bをコードしており、微生物表面や変性した自己表面上で自然免疫応答を増幅します。C3bが結合した後、因子Bは因子Dによって切断されBb断片が生じ、C3コンバターゼ（C3bBb）を形成します。これにより、オプソニン化、アナフィラトキシン産生、さらに下流の膜攻撃複合体形成が駆動されます。この軸は、炎症性シグナル伝達、免疫複合体の処理、そして組織微小環境における凝固系やサイトカインネットワークとのクロストークとも交差します。オルタナティブ経路活性の制御不全やCFBの遺伝的多様性は、眼や腎を含む補体介在性の炎症性表現型に関与しており、ヒト細胞システムにおける補体増幅機構を研究するための機序的な手がかりを提供します。
Factor B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CFB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CFB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CFBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CFBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。