EYA1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404056-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EYA1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EYA1 Double-Nickase-Plasmid (h) und EYA1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EYA1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EYA1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404056-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404056-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA1 kodiert Eyes Absent Homolog 1, einen transkriptionellen Koaktivator und eine dualspezifische Phosphatase, die Entwicklungs-Genprogramme durch Interaktionen mit Proteinen der SIX- und DACH-Familie moduliert. EYA1 trägt zu organogeneseassoziierten Signalnetzwerken bei und integriert eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle der Transkription sowie Entscheidungen über Zellschicksale in Signalwegen, die die epitheliale Differenzierung und den Erhalt von Vorläuferzellen steuern. Eine fehlregulierte EYA1-Funktion ist mit angeborenen Erkrankungen verbunden, die die kraniofaziale, auditive und renale Entwicklung betreffen, und eine veränderte Expression wurde zudem in Zusammenhängen von Tumorprogression und zellulärer Plastizität untersucht. Diese Eigenschaften machen EYA1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise, der Entwicklungsbiologie und phosphatase-regulierter Genexpression.
EYA1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EYA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EYA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EYA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EYA1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.