Exportin 4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404233-ACT

XPO4 codifica a exportina 4, um receptor de exportação nuclear da família carioferina-β que medeia o transporte, dependente de RanGTP, de cargas proteicas selecionadas do núcleo para o citoplasma. Ao controlar a localização subcelular de proteínas regulatórias, a exportina 4 contribui para o tráfego núcleo–citoplasma, o controlo transcricional e programas mais amplos de proteostase. O transporte nucleo-citoplasmático desregulado é uma característica recorrente na biologia do cancro e noutros estados proliferativos ou associados ao stress, tornando o XPO4 um nó útil para estudar como a dinâmica do transporte remodela as saídas de sinalização. A análise funcional de XPO4 apoia estudos mecanísticos de comunicação cruzada entre o tráfego intracelular, a regulação do ciclo celular e as respostas ao stress.

Exportin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XPO4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Exportin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XPO4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XPO4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Exportin 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XPO4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Exportin 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Exportin 4 em células tumorais com expressão de XPO4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.