ETEA Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403730-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ETEAO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ETEA (h) e o Plasmídeo Double Nickase ETEA (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para FAF2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ETEA Anticorpo (F-7): sc-374098
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ETEA Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403730-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETEA Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403730-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAF2 codifica a proteína residente do retículo endoplasmático ETEA (também conhecida como UBXD8), um adaptador com domínio UBX que conecta substratos ubiquitinados à ATPase p97/VCP para promover a degradação associada ao RE (ERAD). Em coordenação com ligases de ubiquitina da membrana do RE e com a maquinaria associada às gotículas lipídicas, a ETEA influencia a proteostase, as respostas ao estresse por proteínas mal dobradas e o metabolismo lipídico, incluindo a renovação de reguladores-chave da homeostase de ácidos graxos e esteróis. Alterações na atividade de FAF2/ETEA têm sido associadas à desregulação da sinalização de estresse do RE e à remodelação metabólica observadas em contextos como a adaptação de células cancerosas e distúrbios lipídicos hepáticos, tornando-a relevante para o estudo da tolerância ao estresse e da regulação de lipídios de membrana.
ETEA O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FAF2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FAF2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FAF2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FAF2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.