ETBR Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420112-LAC

O gene Ednrb de camundongo codifica o receptor de endotelina tipo B (ETBR), um GPCR de classe A que se liga a peptídeos de endotelina para regular a sinalização vasomotora, o desenvolvimento de linhagens derivadas da crista neural e a maturação de melanócitos e do sistema nervoso entérico. O ETBR acopla-se principalmente a proteínas G que ativam a sinalização PLC/IP3–Ca2+, cascatas de MAPK e vias relacionadas ao óxido nítrico, modulando a migração, a proliferação e a diferenciação celulares de maneira dependente do contexto. A atividade de Ednrb está estreitamente ligada a processos de padronização (patterning) e à biologia das células pigmentares, e a disrupção da sinalização de endotelina via ETBR está associada a defeitos na inervação entérica e na função de melanócitos. Por isso, Ednrb é amplamente utilizado como um nó mecanístico para estudar a dinâmica de sinalização de GPCR, o desenvolvimento da crista neural e programas transcricionais específicos de tipo celular em modelos murinos.

As Partículas de Ativação Lentivirais ETBR (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ednrb numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ETBR (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ednrb, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ETBR. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ednrb e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.