Estrogen Receptor beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437278-ACT

O receptor de estrogênio beta (ERβ), codificado pelo gene Esr2 de rato, é um receptor nuclear ativado por ligante que atua como fator de transcrição para regular redes gênicas responsivas ao estrogênio. Após a ligação do hormônio, o ERβ modula a cromatina e recruta correuladores para controlar programas envolvidos em proliferação celular, diferenciação, apoptose e homeostase metabólica. A sinalização do ERβ se cruza com as vias PI3K/AKT, MAPK/ERK e inflamatórias, moldando respostas específicas de tecido em órgãos reprodutivos, cérebro, osso e sistemas cardiovasculares. A atividade desregulada do ERβ e alterações no equilíbrio da sinalização estrogênica têm sido implicadas na biologia de tumores hormônio-responsivos, na neuroinflamação e na disfunção metabólica, tornando o Esr2 um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos de rato.

Estrogen Receptor beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Estrogen Receptor beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Estrogen Receptor beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Estrogen Receptor beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Estrogen Receptor beta em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.