Estrogen Receptor beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400213-ACT

ESR2 codifica o receptor de estrogênio beta (ERβ), um receptor nuclear ativado por ligante que regula programas transcricionais que controlam a proliferação celular, a diferenciação, o metabolismo e a sinalização inflamatória. Após a ligação a estrogênios ou moduladores seletivos, o ERβ interage com elementos de resposta ao estrogênio e complexos de corregradores para coordenar a comunicação cruzada com as vias MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB. A atividade do ERβ contribui para a homeostase específica de cada tecido nos sistemas reprodutor, cardiovascular, imune e nervoso, nos quais a expressão ou a sinalização alteradas têm sido associadas à biologia de tumores responsivos a hormônios e a fenótipos relacionados ao sistema endócrino. Em células humanas, o status de ESR2 é frequentemente avaliado como um determinante do equilíbrio da sinalização estrogênica em relação ao ESR1, orientando estudos de redes transcricionais e regulação da cromatina.

Estrogen Receptor beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ESR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Estrogen Receptor beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ESR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ESR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Estrogen Receptor beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ESR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Estrogen Receptor beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Estrogen Receptor beta em células tumorais com expressão de ESR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.