Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419416
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ERp72 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してERp72ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ERp72 抗体 (B-4): sc-390530
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-419416 | 20 µg | $397.00 |
概要
マウスのPdia4は、小胞体に局在し、酸化的タンパク質フォールディングの過程でチオール–ジスルフィド交換反応を触媒する、プロテインジスルフィドイソメラーゼ（PDI）ファミリーの一員であるERp72をコードする。ERp72は、正しいジスルフィド結合形成を促進し、分泌タンパク質および膜タンパク質のフォールディング、アセンブリー、滞留を制御するシャペロンネットワークと協調することで、小胞体の品質管理を支える。プロテオスタシスにおけるこれらの役割を通じて、Pdia4は小胞体ストレスシグナル伝達や、分泌負荷が高い条件下でレドックスバランスおよび細胞運命決定を形作るアンフォールドタンパク質応答（UPR）経路と機能的に関連している。PDI活性の変化や小胞体ストレスへの適応は、分泌経路の恒常性と酸化的フォールディング能が疾患関連表現型に影響し得る炎症、代謝機能異常、がん生物学などの文脈で、しばしば研究対象となっている。
ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPdia4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pdia4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pdia4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERp72タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、ERp72シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pdia4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- ERp72の機能に不可欠なPdia4エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Pdia4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pdia4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
ERp72 HDRプラスミド（m）および ERp72 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPdia4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPdia4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。