ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419416

Visão geral

O gene **Pdia4** de camundongo codifica a **ERp72**, um membro da família das isomerases de dissulfeto de proteína que reside no retículo endoplasmático e catalisa a troca tiol–dissulfeto durante o dobramento oxidativo de proteínas. A ERp72 contribui para o controle de qualidade do RE ao promover a formação correta de ligações dissulfeto e ao cooperar com redes de chaperonas que regulam o dobramento, a montagem e a retenção de proteínas secretórias e de membrana. Por seu papel na proteostase, **Pdia4** está funcionalmente ligado à sinalização de estresse do RE e às vias da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), que moldam o equilíbrio redox e as decisões de destino celular em condições de alta demanda secretória. Alterações na atividade de PDI e na adaptação ao estresse do RE são frequentemente estudadas em contextos como inflamação, disfunção metabólica e biologia do câncer, nos quais a homeostase da via secretória e a capacidade de dobramento oxidativo podem influenciar fenótipos relevantes para a doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ERp72 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pdia4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pdia4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pdia4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ERp72.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pdia4 para a investigação da sinalização de ERp72, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pdia4 críticos para a função ERp72
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pdia4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pdia4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ERp72 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ERp72 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pdia4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pdia4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.