ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402689

Visão geral

PDIA4 codifica a ERp72, um membro da família das isomerases de dissulfeto de proteínas residente no retículo endoplasmático (RE), que catalisa reações de troca tiol–dissulfeto para apoiar o dobramento oxidativo e o controle de qualidade de proteínas secretadas e de membrana. A ERp72 atua na rede de proteostase do RE juntamente com chaperonas e outras PDIs, contribuindo para a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), a degradação associada ao RE (ERAD) e a manutenção da homeostase redox em condições de estresse do RE. Ao moldar a maturação de proteínas clientes e limitar o estresse proteotóxico, a PDIA4 influencia vias ligadas à secreção, ao processamento de antígenos e à adaptação celular a perturbações no dobramento proteico. A capacidade de dobramento do RE desregulada e o estresse crônico do RE estão implicados na biologia do câncer, em doenças metabólicas e em processos neurodegenerativos, tornando PDIA4 um nó útil para estudos mecanísticos de sinalização de estresse e controle de qualidade do proteoma.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDIA4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDIA4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDIA4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ERp72.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDIA4 para a investigação da sinalização de ERp72, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDIA4 críticos para a função ERp72
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDIA4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ERp72 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDIA4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ERp72 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ERp72 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDIA4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDIA4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.