ERK 2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400043-LAC

MAPK1 codifica a quinase 2 regulada por sinal extracelular (ERK2), uma serina/treonina quinase central na cascata MAPK RAS–RAF–MEK–ERK, que transmite sinais de fatores de crescimento e de estresse da membrana plasmática para alvos citoplasmáticos e nucleares. A ERK2 fosforila diversos substratos, incluindo fatores de transcrição e reguladores do ciclo celular, para controlar proliferação, diferenciação, sobrevivência e motilidade. Por meio de comunicação cruzada (cross-talk) com PI3K/AKT, JNK/p38 e reguladores de retroalimentação como as DUSPs, MAPK1 ajuda a moldar a amplitude e a duração do sinal em muitos tipos celulares. A desregulação da sinalização de ERK é frequentemente associada a estados de sinalização oncogênica e a processos inflamatórios e de neurodesenvolvimento aberrantes, tornando MAPK1 um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de transdução de sinais.

As Partículas de Ativação Lentivirais ERK 2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MAPK1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ERK 2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MAPK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ERK 2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MAPK1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.