ERK 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400010-ACT

MAPK3 codifica a quinase 1 regulada por sinais extracelulares (ERK1), uma quinase de serina/treonina que atua como efetor central da cascata MAPK RAS–RAF–MEK–ERK. A ERK1 transmite sinais de fatores de crescimento, citocinas e estímulos de estresse para regular programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação, metabolismo e sobrevivência celular, por meio da fosforilação de substratos nucleares e citoplasmáticos. Essa via coordena a progressão do ciclo celular, a expressão de genes de resposta imediata e a regulação por feedback de receptores e quinases a montante. A sinalização de ERK desregulada é frequentemente implicada em redes de sinalização oncogênicas e em fenótipos inflamatórios ou neurobiológicos, tornando MAPK3 um nó comum para estudos mecanísticos de reconfiguração de vias e de saídas de sinalização dependentes do contexto.

ERK 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ERK 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ERK 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ERK 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ERK 1 em células tumorais com expressão de MAPK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.