eRF3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404748

Visão geral

GSPT1 codifica o fator de liberação eucariótico 3a (eRF3a), uma GTPase associada ao ribossomo que atua em parceria com o eRF1 para promover a terminação da tradução e favorecer a reciclagem do ribossomo após o reconhecimento do códon de parada. Por meio da hidrólise de GTP regulada e de interações com a proteína ligadora de poli(A) e outros fatores de tradução, o eRF3a ajuda a coordenar a vigilância de mRNA, a proteostase e a fidelidade da síntese proteica. Alterações no controle da terminação da tradução e nas vias de controle de qualidade de RNA têm sido associadas a programas desregulados de crescimento celular e respostas ao estresse, o que torna o GSPT1 um ponto útil para estudar como o controle translacional se integra a redes de sinalização e de homeostase. Na pesquisa biomédica, a perturbação do eRF3a pode ser explorada para investigar mecanismos de readthrough de códons de parada, o acoplamento à degradação mediada por nonsense (NMD) e vulnerabilidades que surgem quando a manutenção do proteoma é comprometida.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO eRF3a (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GSPT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GSPT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GSPT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína eRF3a.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GSPT1 para a investigação da sinalização de eRF3a, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GSPT1 críticos para a função eRF3a
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GSPT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo eRF3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo eRF3a Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GSPT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo eRF3a Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR eRF3a (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GSPT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GSPT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.