ERBIN CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402637-ACT

ERBIN（ERBB2 interacting protein）は、PDZドメインを有する足場（スキャフォールド）タンパク質で、基底外側膜に局在し、受容体複合体の組み立て、輸送、シグナルの振り分けを調整します。ERBB2/EGFR経路の出力を制御し、膜近傍のシグナル伝達ノードを編成して受容体を下流エフェクターへ結び付けることで、MAPKおよびPI3Kシグナルとも交差します。さらにERBINは、極性や接着の制御因子との相互作用を介して上皮の極性や接着結合の構造にも影響し、細胞構築とシグナル伝達の忠実性を形作ります。ERBINの発現異常や足場機能の変化は、異常な増殖因子シグナルや極性異常と関連しており、腫瘍学をはじめとする上皮性病態の機序研究において重要です。

ERBIN CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERBINの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERBIN CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERBIN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERBIN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERBINの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERBIN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERBIN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERBIN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERBIN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。