EPX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402513

概要

EPX（好酸球ペルオキシダーゼ）は、ヘムを含む顆粒酵素をコードする遺伝子で、主として好酸球で発現しています。EPXは、ハロゲン化物およびチオシアン酸依存性の酸化反応を触媒し、抗菌活性の発揮や炎症性微小環境の調節に寄与します。反応性酸化物質を産生することで、EPXは自然免疫のエフェクター経路、レドックスシグナル伝達、ならびに白血球の動員や組織傷害応答に影響する細胞外マトリックスのリモデリング機構と交差します。EPX活性の変化および好酸球の脱顆粒は、気道・消化管疾患における好酸球性炎症や過敏反応と関連づけられています。そのためEPXは、好酸球活性化の分子指標として広く用いられており、酸化ストレス駆動性の障害や免疫調節を研究するための機能的な結節点としても利用されています。

EPX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEPX遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EPX内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EPXのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EPXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EPXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EPX欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EPXの機能に不可欠なEPXエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EPXゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EPX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEPX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EPX遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EPX HDRプラスミド（h）および EPX HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEPXホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEPX標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。