EPX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402513

Panoramica

EPX (perossidasi degli eosinofili) codifica un enzima dei granuli contenente eme, espresso prevalentemente negli eosinofili, dove catalizza reazioni ossidative dipendenti da alogenuri e tiocianato che contribuiscono all’attività antimicrobica e alla modulazione dei microambienti infiammatori. Generando ossidanti reattivi, EPX si integra con le vie effettrici dell’immunità innata, la segnalazione redox e i meccanismi di rimodellamento della matrice extracellulare che influenzano il reclutamento dei leucociti e le risposte al danno tissutale. Alterazioni dell’attività di EPX e la degranulazione degli eosinofili sono state associate all’infiammazione eosinofila nelle patologie delle vie aeree e gastrointestinali, nonché alle reazioni di ipersensibilità. EPX è pertanto ampiamente utilizzata come indicatore molecolare dell’attivazione degli eosinofili e come nodo funzionale per studiare il danno guidato dallo stress ossidativo e la regolazione immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EPX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EPX in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EPX insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EPX a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EPX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EPX per lo studio della segnalazione di EPX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EPX critici per la funzione di EPX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EPX per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EPX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EPX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EPX. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EPX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EPX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EPX per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EPX definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.