EPHX2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402095-NIC

EPHX2 codifica a epóxido-hidrolase solúvel (sEH), uma enzima bifuncional que converte epóxidos lipídicos derivados de ácidos graxos poli-insaturados nos dióis correspondentes, modulando assim o equilíbrio de ácidos epoxieicosatrienoicos e de outros ácidos graxos epoxidados relacionados. Por meio dessa etapa de hidrólise de epóxidos, o EPHX2 influencia vias de sinalização de eicosanoides e oxilipinas que regulam o tônus vascular, a sinalização inflamatória, as respostas ao estresse oxidativo e o metabolismo celular. Alterações na atividade do EPHX2 e nos perfis de oxilipinas têm sido associadas a fenótipos cardiometabólicos, incluindo hipertensão, resistência à insulina e processos relacionados à aterosclerose, bem como a sinalização neuroinflamatória e ligada à dor. Na pesquisa biomédica, o EPHX2 é frequentemente estudado no contexto da biologia de mediadores lipídicos, da função de células endoteliais e imunes e de vias de resposta ao estresse que conectam entradas metabólicas a saídas inflamatórias.

sEH O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EPHX2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EPHX2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EPHX2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EPHX2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.