ephrin-B2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400777-LAC

EFNB2 codifica a efrina‑B2, um ligante ancorado à membrana para as tirosina‑quinases receptoras EphB, que medeia sinalização bidirecional célula–célula por meio da sinalização reversa da efrina e da sinalização direta (forward) do Eph. Esse eixo regula o brotamento angiogênico, a especificação artério‑venosa, a morfogênese neural e cardíaca e a formação de limites teciduais, coordenando o remodelamento do citoesqueleto, a dinâmica de adesão e a migração direcional por vias como as GTPases da família Rho, MAPK/ERK, PI3K/AKT e Src/FAK. A sinalização EFNB2–EphB desregulada tem sido associada a remodelamento vascular aberrante e a comunicação inflamatória cruzada no microambiente, sendo frequentemente estudada no contexto da angiogênese tumoral, de programas de invasão associados à metástase e de defeitos vasculares do desenvolvimento. Assim, a expressão de EFNB2 e o estado de sinalização da efrina‑B2 são comumente avaliados em biologia endotelial, interações neurovasculares e modelos de organogênese.

As Partículas de Ativação Lentivirais ephrin-B2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de EFNB2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ephrin-B2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição EFNB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ephrin-B2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo EFNB2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.